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青霉素
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗青霉素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物青霉素的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物青霉素的含量。
二、試劑盒特性
組織、蜂蜜、牛奶 ································ 2ppb
蜂蜜、牛奶樣本因存在一定的干擾，定量檢測下限為4ppb
青霉素· ········································ 100%
氨芐青霉素········································ 0.8%
鄰氯青霉素 ······································· 0.2%
雙氯青霉素 ······································· 0.1%
阿莫西林 ········································· 0.1%
頭孢塞呋 ········································· 0.1%
組 織 ········································· 75±19%
蜂蜜 、牛奶 ·································· 70±17%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標(biāo)準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 5X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：*、乙腈、正己烷、亞硝基鐵氰*鈉、硫酸鋅
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 C液（牛奶、奶粉樣本）：
10.7g 亞硝基鐵氰化*加去離子水100ml溶解。
配液2 D液（牛奶、奶粉樣本）：
28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。
配液3 0.1M NaOH溶液
0.4gNaOH加去離子水100ml溶解。
配液4 乙腈-0.1M NaOH溶液
84ml乙腈16ml 0.1M NaOH混合均勻
配液5 樣本復(fù)溶液：
將5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1：4稀釋。
配液6 1M NaOH溶液
4g NaOH加去離子水100ml溶解
（a）組織（雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
（b）蜂蜜處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
（c） 牛奶樣本處理方法一
樣本稀釋倍數(shù)：20
注：如果離心后仍然渾濁，再重復(fù)沉淀過程。
（d）牛奶樣本處理方法二
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含青霉素量成負相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中青霉素實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第)—個標(biāo)準（0標(biāo)準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準曲線的繪制與計算
以標(biāo)準品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以青霉素標(biāo)準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準曲線中，從標(biāo)準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中青霉素實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
實驗代做服務(wù)：
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